Mezenşimal kök hücrelerden farklılaştırılmış işaretli kardiyomiyositlerin in vivo implantasyon sonrası ektopik göç potansiyelinin incelenmesi
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ESİN AKBAY
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): MEHMET ALİ ONUR
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışma kapsamında, sıçan yağ dokusundan izole edilen mezenşimal kök hücreler 5-Aza ile kardiyomiyosite farklılaştırıldıktan sonra BrdU ile işaretlenmiştir. İyonik olan ve olmayan deterjanlar ile muamele sonucunda aselülerize edilmiş kalp doku iskelelerine bu farklılaştırılmış işaretli hücrelerin uygulanması ve bu hücre ekili yapı malzemesi kompozitinin sıçan retroperitoneumuna implantasyonu ve implante edilen hücrelerin ektopik göçü incelenmiştir. Çalışmanın ilk bölümünde sıçan gonadal ve subkutan yağ dokusu izole edilmiştir. Kardiyomiyojenik farklılaştırma faktörü olarak kimyasal ajan olan 5-Aza kullanılmıştır. Farklılaştırma prosedürü sırasında besi ortamı haftada iki kez değiştirilmiş ve hücreler dört hafta boyunca 37oC'de ve %5CO2-%95O2'de standart kültür koşullarında inkübe edilmiştir. Hücre farklılaşmasını takiben karakterizasyon için kardiyomiyositlere özgül moleküllerle floresan boyaması yapılmıştır. Kardiyak genlerin ifadesinin araştırılması için RT-PCR analizi yapılmıştır. Kardiyomiyosite farklılaştırıldığı düşünülen kök hücreler BrdU (5-bromo-2-deoksiüridin) ile kültür ortamında 24 saat süre ile inkübe edilerek işaretlenmiştir. Hücrelerin işaretlenmesinden sonra tripsinizasyon ile süspanse halinde elde edilen hücreler aselülerize edilmiş kalp doku iskeleleri ile 24 saat inkübe edilmiştir. İnkübasyon sonrasında (a) hücre içeren doku iskelesi (b) hücre içermeyen doku iskelesi ve (c) kontrol grubu olacak şekilde üç farklı grup ile in vivo çalışmalar yapılmıştır. Anesteziye alınan tüm deney hayvan grupları implantasyonu takiben 1., 2. ve 4. haftalarda sakrifiye edilmiştir. İmplante edilen doku iskelesi ile bazı dokular (karaciğer, dalak, abdominal aorta, böbrek ve kalp) toplanmıştır. Elde edilen dokular immünohistokimyasal tekniği ve RT-PCR ile incelenmiştir. Sonuç olarak; kardiyomiyosite farklılaşan hücrelerin kardiyogenezis öncülü olan genleri (MEF2B, GATA-4, ACTC-1) ifade ettiği gösterilmiştir. AdMSC'ler için BrdU işaretleme yöntemi optimize edilmiştir. 1µM BrdU ile 24 saat inkübasyonun işaretleme için ideal olduğu gösterilmiştir. Aselülerize doku yapı iskelesinin eldesinde, hücre uygulaması için düşük konsantrasyonlardaki iyonik ve iyonik olmayan deterjan solüsyonlarını içeren yöntemin en verimli yöntem olduğu gösterilmiştir. İmplante edilen doku iskelelerinin herhangi bir immünolojik reaksiyona neden olmadığı, implantasyon bölgesinde enfeksiyona yol açmadığı gösterilmiştir. Aynı zamanda doku iskelesi üzerine uygulanan hücrelerin zaman içerisinde kardiyomiyosite özgü genleri ifade etme potansiyellerinin arttığı gösterilmiştir.