Fare miyoblast hücre hattında KLF5 geninin farklılaşma sürecine etkilerinin araştırılması
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: UĞUR AKPULAT
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): YUSUF ÇETİN KOCAEFE
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:İskelet kasının embriyonik gelişimi ve hasar sonrası tamiri, miyojenik düzenleyici faktörler (MRF'ler) ve paired-homeobox transkripsiyon faktörleri gibi benzer moleküler düzenleyiciler tarafından kontrol edilmektedir. Miyogenez sıkı bir şekilde kontrol edilen karmaşık bir işlemdir ve bu süreçte miyoblastların aktivasyonunu, proliferasyonunu, miyojenik yolağa adanmışlığını, göçünü ve füzyonunu kontrol eden diğer proteinler ve mekaznizmalar yoğun bir şekilde incelenmektedir. Çinko parmak yapısı içeren bir transkripsiyon faktörü olan Klf5'in kas farklılaşması sürecinde rol oynadığını önceki çalışmalarımız ortaya koymuştur. Klf5'in bazal ifadesi in vitro koşullarda miyoblastların farklılaşması ve miyotüp oluşumu sırasında artmaktadır. Benzer şekilde in vivo akut kas hasarı tamiri sürecinde yeni kas liflerinin gözlendiği rejenerasyon sırasında ifadesi artmakta ve doku mimarisinin tekrar kurulmasıyla ilk seviyelerine dönmektedir. Klf5 ifadesi kalıtsal miyopatiler ve hayvan modellerinde de artış göstermektedir. Klf5 in vivo rejenerasyon ve in vitro farklılaşma süreçlerinde SUMOlanarak çekirdeğe göç etmektedir. Bu tez çalışması sürecinde yapılan çalışmalar ile Klf5 ifadesinin shRNA aracılıklı kalıcı ve uyarılır koşullarda sustutulması sağlanarak miyoblastlarda proliferasyon hızını ve farklılaşma süreçlerinde füzyon ve miyotüp oluşumu aşamalarını düzenlediği anlaşılmıştır. Diğer yandan Klf5 ifadesinin artırılması miyoblast hücre döngüsünün durmasına neden olmaktadır. Bu bulgular dominant negatif Klf5 aracılığı ile işlevinin ortadan kaldırılması yoluyla da doğrulanmıştır. Kas farklılaşma programının M-cadherin, NCAM ve Desmin gibi belirteçlerinin ifade analizleri ve hücre çoğalma analizleri yapılarak miyoblast proliferasyon hızının ortaya koyulması ile bu bulgular desteklenmiştir. Klf5'in miyoblast proliferasyonu ve farklılaşması dışında hücre hareketi üzerine de bir rolü olduğunu ortaya koyacak sonuçlar da elde edilmiştir. Klf5 ve kas farklılaşma programının diğer düzenleyicileri arasındaki etkileşimin ortaya koyulması amacıyla yapılan çalışmalar, Klf5'in Myogeninin üzerinde düzenleyici etkisi bulunduğunu ortaya koyarken, ana düzenleyicilerden biri olan MyoD'nin etkisi altında inhibitör etkilerini kaybettiği yönünde bulgular elde edilmiştir. Bu veriler Klf5'in iskelet kası öncül hücrelerinin çoğalma ve farklılaşmasında rol oynayan ve kas dokusu tamirinde etkin, yeni bir düzenleyici transkripsiyon faktörü olduğunu göstermektedir.