Modulation of glucocorticoid ınduced tumor necrosis factor receptor (GITR)-gıtr ligand (GITRL) ınteraction in breast cancer cells under the control of ataxia telangiectasia mutated (ATM) promoter
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Kanser Enstitüsü, TEMEL ONKOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2017
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: BENGİSU ULUATA DAYANÇ
Danışman: GÜNEŞ ESENDAĞLI
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bazal-benzeri meme kanseri (BBMK) için tedaviye cevap sınırlıdır ve bu agresif meme kanseri türü kötü prognoz ve yüksek mortalite gösterir. İlk amacımız BBMK hücre hatlarında iyonize edici radyasyonun ATM aktivitesine etkisinin incelenmesidir. İkinci amacımız radyasyon ile GITR ve GITRL ifadelerini incelerken, BBMK hücrelerinde GITR-GITRL etkileşimine bağlı canlılığın çalışılmasıdır. Bazal-benzeri (MDA-MB-231, HCC38, MDA-MB-468) ve luminal (MCF-7, BT-474, SK-BR-3) meme kanseri hücre hatlarındaki ATM ifadeleri RT-PCR aracılı incelenmiş ve benzer bulunmuştur. ATM (S1981) fosforilasyonunun BBMK hücrelerinde radyasyon sonucu artışı Western Blot deneyleri aracılı gösterilmiştir. "pATM-GL3" Lusiferaz raporlayıcı plazmidi ile transfekte edilen HCC38 hücreleri bazal seviyede ve radyasyon sonrası yüksek ATM aktivitesi göstermiştir. ATM mRNA düzeylerinde fark olmamasına rağmen protein düzeylerinde farklar gözlemlenmesi post-transkripsiyonel bir kontrol mekanizması olabileceğini önermektedir. BBMK hücrelerinde GITR ve GITRL ifadeleri RT-PCR aracılı incelenmiştir ve radyasyon ile değişmedikleri bulunmuştur. MDA-MB-231 ve MDA-MB-468 hücre hatları yüksek GITRL ifadesi gösterirken, HCC38 hücre hattı RT-PCR ve akım sitometrisi ile GITR pozitif olarak belirlenmiştir. GITR+ HCC38 hücreleri rekombinant GITRL proteini ile farklı serum konsantrasyonlarında (1% ve 10%) inkübe edilmiştir ve kanser hücrelerinin canlılığı, proliferasyonları ve metabolik olarak aktif canlı hücreler, sırasıyla DRAQ7 boyaması, CFSE ve MTT testleri aracılı incelenmiştir. Tek başına GITR uyarımı HCC38 hücrelerinin canlılık ve proliferasyonlarını etkilemezken, iyonlaştırıcı radyasyon ve GITR uyarımının hücre canlılığında kümülatif etkisi vardır. DRAQ7 boyaması ile hücre ölümü test edildiğinde, 80 ng/ml rGITRL ve 5 Gy iyonlaştırıcı radyasyona eş zamanlı maruz kalan hücrelerin canlılığında azalma olduğu gözlemlendi. Sonuç olarak, bu çalışma GITR uyarımı ve iyonlaştırıcı radyasyonun kümülatif etkisinin meme kanseri hücrelerinin canlılığını etkileyebileceğini göstermiştir.