Bazı gram negatif bakterilerin bakteriyosin üretimlerinin araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SEBAHAT TEKCAN DÜĞENCİ
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): IŞIL SEYİS BİLKAY
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, çeşitli klinik örneklerden izole edilen Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa ve Klebsiella pneumoniae suşlarının antibakteriyel aktiviteleri araştırıldı. En yüksek antibakteriyel aktiviteye sahip suşlar E.coli 26S, E. coli 14, E. coli 27, P. aeruginosa 8, P. aeruginosa 15 ve P. aeruginosa 22 olarak bulundu. Bu suşlardan elde edilen antibakteriyel maddelerin proteolitik enzimlere kısmen ya da tamamen hassas olduğu saptandı. Antibakteriyel aktivite belirlenmesi için damlatma, disk difüzyon ve kuyucuk yöntemleri karşılaştırılarak en uygun yöntem seçilen disk difüzyon yöntemi ile bakteriyosin üreten en verimli suşlar olarak E. coli 26S ve P. aeruginosa 8 seçildi. Optimum bakteriyosin üretimleri her iki bakteri suşu için de Luria Bertani Broth besiyerinde, pH 7.0' de 37 oC'de ve 21. saatte olduğu saptandı. Çalkalamalı ya da statik koşullar bakteriyosin üretimlerini etkilemedi. E. coli 26S' den elde edilen bakteriyosinin 75 oC' de 30 dk ve P. aeruginosa 8' den elde ettiğimiz bakteriyosinin ise 90 oC' de 30 dk kararlılığını koruduğu bulundu. Metanol, butanolün her iki suşun bakteriyosin aktiviteleri üzerine etkileri olmadığı belirlendi. Etanol, aseton, SDS ve Tween 80' in E. coli 26S bakteriyosinine sırasıyla %25, %30, %10, %20; P. aeruginosa 8 bakteriyosinine ise sırasıyla %32, %37, %5, %21 oranlarında etkili olduğu saptandı. Kloroformun, E. coli 26S bakteriyosini üzerine etkisi olmadığı, P. aeruginosa 8 bakteriyosini üzerine %16 kayba neden olduğu bulundu. 4 oC' de 180.günde E. coli 26S' in bakteriyosin aktivitesini %70 ve P. aeruginosa 8' in bakteriyosin aktivitesini ise %41 oranında koruduğu belirlendi. – 20 oC' de 6. ayda bakteriyosin aktivitelerinde herhangi bir kayıp saptanmadı. E. coli 26S ve P. aeruginosa 8 bakteriyosinlerinin saflaştırılması için %80 oranında amonyum sülfat çöktürmesinin uygun olduğu saptandı. E. coli 26S ve P. aeruginosa 8' in bu çalışmada kullanılan tüm antibiyotiklere duyarlı olduğu belirlendi. E. coli 26S ve P. aeruginosa 8' den yapılan plazmid DNA izolasyonu sonucu plazmid varlığı saptanmadı. Sonuç olarak, E. coli 26S ve P. aeruginosa 8' den antibiyotiklere alternatif olabilme potansiyeli olan bakteriyosinler elde edildi. Anahtar Kelimeler: Bakteriyosin, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, antibakteriyel aktivite, bakteriyosin karakterizasyonu