Glikoprotein ayrılması için monolitik sıvı kromatografisi kolonlarının hazırlanması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2011
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: CANAN ARMUTCU
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): ADİL DENİZLİ
Özet:Monolitik kolonlar tek parçalı gözenekli yapılar olarak, yerinde polimerizasyonlayani kolon bir tüp içerisine yerleştirilerek hazırlanmaktadırlar. Gerekli durumlarda,matriks yüzeyi modifiye edilerek istenilen bağlama özelliğine sahip adsorbentüretimi yapılmaktadır. Kolay hazırlanabilmesi, eşsiz özellikleri ve mükemmelperformansından dolayı Yüksek Performans Sıvı Kromatografisinde (HPLC)monolitik kolonlar son dönemlerde dikkatleri üzerine çekmektedirler. Sunulan tezçalışmasında insan plazmasından etkin bir şekilde insan-IgG ayrılması için etkinve kolay hazırlanabilir monolitik bir kolon geliştirilmiştir. Pseudospesifik ligand Nmetakriloil-L-aspartik asit (MAAsp), L-aspartik asit ve metakriloil klorür kullanılaraksentezlenmiştir. Monolitik kolonlar, MAAsp monomeri ile 2-hidroksietil metakrilat(HEMA)'ın yığın polimerizasyonu ile çelik kolonların içinde üretilmiştir. Elde edilenpoli(HEMA) ve Asp-30 monolitik kolonların spesifik yüzey alanları sırasıyla 173.6m2/g ve 213.4 m2/g'dır. Sentezlenen MAAsp monomeri, Fourier Transform InfraredSpektroskopisi (FTIR) ve Nükleer Manyetik Rezonans (NMR) ile karakterizeedilmiştir. Poli(HEMA-MAAsp) monolitik kolonlar, şişme testi, FTIR, TaramalıElektron Mikroskopisi (SEM) ve elementel analiz ile karakterize edilmiştir.Monomer çözeltisine 30 mg MAAsp eklenerek hazırlanan Asp-30 monolitikkolonun denge şişme oranı % 62.5'dir. Sulu çözeltilerden ve insan plazmasındanIgG adsorpsiyonu ve desorpsiyonunda farklı miktarlarda MAAsp içeren monolitikkolonlar kullanılmıştır. IgG adsorpsiyonunun kullanılan tampon sistemine bağlıolduğu gözlenmiştir ve sulu çözeltilerden IgG maksimum adsorpsiyon miktarı pH6.0 fosfat tamponunda 0.087 mg/g'dır. Ayrıca bu afinite kolonlarının insanplazmasından tek basamakta insan-IgG'si ayrılmasında kullanılabileceğibelirlenmiştir. Poli(HEMA-MAAsp) monolitik kolonların tekrarlanan adsorpsiyondesorpsiyon döngülerinde adsorpsiyon kapasitesinde belirgin bir azalma olmadantekrar kullanılabileceği de gösterilmiştir.Anahtar Kelimeler: Monolitik kolon, IgG ayrılması, pseudospesifik ligandlar,Yüksek Performans Sıvı Kromatografisi (HPLC).