Expression and functional analysis of CCRL2 atypical chemokine receptor variants on breast cancer cells

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, TÜMÖR BİYOLOJİSİ VE İMMÜNOLOJİSİ ANABİLİM DALI, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2014

Tezin Dili: İngilizce

Öğrenci: PARİSA SARMADİ

Danışman: GÜNEŞ ESENDAĞLI

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Sarmadi, P. CCRL2 atipik kemokin reseptör variyantlarının meme kanseri hücrelerinde ekspresyonu ve fonksyonel analizi. Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tümör Biyolojisi ve İmmünolojisi Programı, Doktora Tezi, Ankara, 2014. Kemokinler ve kemokin reseptörlerin kompleks ağı atipic (decoy) kemokin reseptörleri tarafından regüle edilir. Atipik kemokin reseptörleri inflammatuvar yanıtların sonlandırılmasında rol oynarlar ve CCRL2 en yeni üyedir. CCRL2'nin CCL5, CCL19, ve chemerin'e bağlandığı ve bu kemokinlerin lokal konsantrasyonunu azalttığı öne sürülmüştür. İnsan CCRL2 geninin iki varyantı vardır; CRAM-A ve CRAM-B. Bu çalışmada, CRAM-A ve CRAM-B ekspresyonu RT-PCR yöntemi ile meme kanseri hücre hatlarında, periferik kan mononükleer hücrelerinde (PBMC), ve izole edilmiş immün hücrelerde IFN-γ veya LPS uyarımından sonra belirlendi. pCRAM-A/B-IRES2-EGFP rekombinant DNA'ları oluşturuldu ve PCR, restriksyon kesimi, ve DNA dizileme analizi ile doğrulandı. Bu plazmid HEK293T hücre hattına, MDA-MB-468 ve BT-474 meme kanseri hücre hatlarına transfekte edildi. Transfeksyon etkinliği (GFP ekspresyonu) ve rekombinant CRAM ekspresyonu akım sitometri ile analiz edildi. Fonksyonel analizi için, Ca2+ flux, ligand bağlanma, reseptör internalizasyonu, ve ligand uzaklaştırma deneyleri yapıldı. Beklendiği gibi, CCL5, CCL19, ve chemerin hücre içi Ca2+ akımını uyarmadı. Meme kanseri hücreleri üzerinde, CRAM-A ekspresyonu özellikle IFN-γ uyarımından sonra arttı. CCL19 hücre dışı ortamdan en etkin şekilde uzaklaştırılan kemokindi. Bu etki rekombinant CRAM-A ile transfekte edilmiş hem HEK293T ve hem BT-474 hücre hatlarında görüldü. Bu sonuçlara göre, CRAM-A ekspresyonunun tümöre doğru T hücre infiltrasyonunu azaltabilen bir immün kaçış makanizması olarak görev yapabilecesi düşünülmüştür. Anahtar Kelimeler: Atipik kemokin reseptörü, CCRL2, Kemokin, Rekombinant DNA teknolojisi.