PHEMA-Jelatin kriyojel kemik doku iskelelerinin sentezi, karakterizasyonu ve biyolojik aktivite kazandırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: DİLARA PERVER
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU, HANDAN YAVUZ ALAGÖZ
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Sunulan tez çalışmasında, kemik doku rejenerasyonuna yönelik olarak Testosteron (TST) ve 17-β estradiol (E2) yüklü poli (laktik-ko-glikolik asit) PLGA nanopartikül-PLGA/Jelatin kriyojel doku iskelesi sistemi geliştirilmesi ve oluşturulan sistemin in-vitro etkinliğinin adipoz kökenli mezenşimal kök hücre (ADMSC) kültürlerinde araştırılması amaçlanmıştır. Tez çalışmasının ilk kısmında salım çalışmaları ve in-vitro hücre kültür çalışmaları için kullanılmak üzere uygun kriyojel doku iskele yapısı belirlenmiştir. %8-10-12 ve 15 (v/v) HEMA (2-hidroksietil metakrilat) ile %1-2 ve 4 Jelatin monomer bileşimlerine sahip iskeleler tüp içinde ve cam arasında olmak üzere iki farklı yolla sentezlenmiştir. 1/6 PEGDA poli(etilenglikol diakrilat) ve 1/20 gluteraldehit çapraz bağlayıcı derişimine sahip PHEMA poli(2-hidroksietil metakrilat) iskeleler kriyojelleşme yöntemi ile elde edilmiştir. Yapılan karakterizasyon çalışmaları sonrası %10 HEMA %4 Jelatin içerikli PHEMA-Jelatin kriyojel doku iskelesinin kullanımına karar verilmiştir. Tez çalışmasının diğer aşamasında PLA/PGA 65:35 bileşimine sahip poli-laktik asit/poli-glikolik asit kopolimerlerinden, boş ve ayrı ayrı olacak şekilde TST ve E2 yüklü nanopartiküller, emülsiyon-çözücü-buharlaştırma yöntemi ile hazırlanmıştır. Nanopartiküllerin karakterizasyonu sonucu, boş ve hormon yüklü partikül büyüklüklerinin sırasıyla yaklaşık 200 ve 250 nm olduğu saptanmıştır. Üretilen nanopartiküllerin TST enkapsülasyon veriminin %63, E2 enkapsülasyon veriminin ise %53 olduğu, belirlenmiştir. Nanopartiküllerden TST salım çalışması 62 gün sürdürülmüş ve nanopartiküllere yüklenen TST'nin %75'inin salındığı saptanmıştır. TST veya E2 yüklü nanopartiküller önceden hazırlanan doku iskelelerine emdirilerek yüklenmiş ve SEM görüntüleri alınarak yapıya başarılı bir biçimde katıldıkları gözlemlenmiştir. Doku iskelelerinden salım çalışması TST için 62 gün, E2 için 35 gün sürdürülmüştür. 62 günde TST'nin %62'si, 35 günde E2'nin %45'inin salındığı saptanmıştır. Tezin son aşamasında, TST ve/veya E2 içeren PLGA nanopartikül-PHEMA/Jelatin kriyojel doku iskelesi sisteminin osteojenik aktivitesi ADMSC'ler kullanılarak in-vitro koşullarda hücre kültürü çalışmaları ile incelenmiştir. Doku iskelelerinde hücre üremesi MTT (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazolyum bromür) analizi ile hücrelerin doku iskelesi içerisindeki morfolojileri ise SEM (taramalı elektron mikroskobu) ile belirlenmiştir. Erken dönem osteojenik farklılaşma, ALP (alkalen fosfataz) aktivitesinin ölçümü ile belirlenmiştir. RT-PCR (gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu) ile ADMSC'lerin kollajen I, RunX2, osteokalsin, osteopontin, ve ß-aktin ekspresyon (ifade) seviyeleri tespit edilmiştir. Analiz sonuçlarına göre hücrelerin yapışması, üremesi ve farklılaşmaları üzerinde testosteron ve 17-β estradiol yüklü PLGA emdirilen doku iskelelerinin ayrı ayrı, nanopartikülsüz doku iskelelerine göre daha etkili olduğu bulunmuştur. Ayrıca iki hormonun birden yüklü olduğu doku iskelelerindeki ADMSC'lerin yapışma, üreme ve farklılaşma özelliklerinin diğer gruplardan daha üstün olduğu belirtilmiştir.