Şap virusu üretiminin dolgulu reaktörlerde araştırılması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyomühendislik A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2010
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: GENCAY ERGİN
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Sunulan tez çalışmasında, dolgulu yataklı biyoreaktörde mikrotaşıyıcılı hücre kültürü teknolojisi kullanılarak Şap virusu üretimi incelenmiştir. Çalışmada, dokunmamış poliester fabrik (NWPF) yapı üzerinde üretilen BHK-21 hücreleri ve O tipi Şap virusu kullanılmıştır.Çalışmanın ilk aşaması durgun ortamda, NWPF diskli ve disksiz 24 gözlü TCPS kaplarında gerçekleştirilmiştir. Toplam hücre sayısı ve özgül üreme hızının (?) belirlenmesi için MTT analizi kullanılmıştır. Çalışmada kullanılan BHK-21 hücrelerinin özgül üreme hızları diskli ve disksiz kültürlerde sırasıyla, 0,038 sa-1 ve 0,046 sa-1 olarak hesaplanmıştır. Ayrıca, ortalama özgül glikoz tüketim hızı (qglu) ve ortalama özgül laktat üretim hızları (qlac) diskli kültürler için (0-96 saat aralığı) sırasıyla, 3,22x10-10 mmol glikoz hücre-1 sa-1 ve 5,21x10-10 mmol laktat hücre-1 sa-1; disksiz kültürler için (0-48 saat aralığı) ise 3,42x10-10 mmol glikoz hücre-1 sa-1 ve 5,08x10-10 mmol laktat hücre-1 sa-1 olarak hesaplanmıştır. Üretilen virusların 146 S miktarlarının, 96 saat inkübe edilen diskli kültürlerde 48 saatte doygunluğa ulaşan disksiz kültüre göre 2 kat daha fazla olduğu belirlenmiştir.Çalışmanın ikinci aşaması 0,5 L çalışma hacimli dolgulu yataklı biyoreaktörde gerçekleştirilmiştir. Çalışmalarda başlangıç hücre sayısı, taşıyıcı konsantrasyonu ve kültür süresinin hücre ve virus verimi üzerindeki etkileri araştırılmıştır. Hemositometrik yöntemle hücre sayımı pratik olarak mümkün olmadığı için hücre sayıları indirek yöntemler kullanılarak tahmin edilmiştir. Bu amaçla besiyerinin kimyasal analizleriyle glikoz ve laktata ait özgül hızlardan yararlanılmış ve ayrıca dinamik yöntemle oksijen tüketim hızının belirlenmesi ile tahmini hücre sayıları belirlenmiştir. Sonuçlar dolgulu yataklı reaktörde virus titrelerini etkileyen en önemli faktörün başlangıç hücre sayısı olduğunu göstermiştir. Maksimum 146 S miktarı (4,20 ?g/mL), 5x105 hücre/mL ile başlanan ve virus inokulasyonundan önce 48 saat inkübe edilen kültürlerden elde edilmiştir. Bu değer monolayer kültüre göre 2,5 kat ve süspanse kültürlere göre ise 5 kat daha yüksek olarak bulunmuştur.Çalışma sonunda elde edilen bulgulardan dolgulu yataklı biyoreaktörlerin çalışma hacminin 5-20 L kapasiteye çıkartılması ve biyoreaktör işletim sisteminin kesikli kültür yerine perfüzyon sistemine çevrilmesiyle BHK-21 hücresi ve Şap virusu üretimi için optimum koşulların sağlanacağı düşünülmektedir. Böylece Şap virusu üretimi, daha az işçilik ve malzeme maliyeti olan, kolay çalıştırılabilir, kontaminasyon riski düşük ve daha az enerji tüketen avantajlı bir sistemle, yüksek verimde gerçekleştirilebilecektir.