Fare miyoblast hücre hattında (C2C12 hücre hattı) klf5 geni üzerinde hedefli insersiyon gerçekleştirilmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Tıbbi Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: DUYGU AKÇAY
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): YUSUF ÇETİN KOCAEFE
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Klf5, embryonik kök hücreler ve erişkin epitel dokuda yaygın ifadesi olan, doku ve hücre tipine göre farklı işlevler sergileyen çinko parmak yapısında bir transkripsiyon faktörüdür. KLF5, gelişim sürecinde, embriyonik kök hücrelerin kök hücre özelliklerinin sürdürülmesinde görev almaktadır. Ayrıca somatik hücrelerde farklılaşmanın kontrolü, mitoz, apoptoz, hücre göçü, enflamasyon, anjiyogenez ve farklılaşma gibi çok çeşitli temel hücresel işlevleri düzenlediği bilinmektedir. Daha önce yapılan çalışmalar Klf5 transkripsiyon faktörünün, iskelet kası kök hücrelerinin çoğalma ve farklılaşma süreçlerini doğrudan düzenlediğini göstermiştir. Bu çalışmaların devamında yürütülecek olan işlevsel genombilim çalışmaları için alınan ticari antikorların büyük kısmının özgüllüğünün sınırlı, afinitesinin düşük olduğu ve Klf5'in işlevselliğinin gerektirdiği "post-translasyonel" modifikasyonları tanımadığı anlaşılmıştır. Western blot, protein immünçöktürme, kromatin immünçöktürme gibi işlevsel protein çalışmalarında karşılaşılan soruna çözüm oluşturabilecek yaklaşımlardan biri de genom düzenleme araçları yardımı ile hücre genomunda yer alan ve Klf5 proteinini kodlayan genin N-terminaline karşılık gelen kısmına, proteinin tanınmasını kolaylaştıracak yeni bir epitop dizisi yerleştirilmesidir. Bu tezin amacı genom düzenleme araçları aracılığı ile KLF5 proteininin N-terminal kısmına yerleştirilen V5-epitop dizisini ifade eden "engineered" bir fare miyoblast hücre hattı oluşturmaktır. V5 epitop dizisi yardımı ile KLF5 proteininin hücre içinde tanınması ve takibi sağlanarak yukarıda bahsedilen sorunlara alternatif bir çözüm oluşturulmuştur.Bu çalışma sonucunda elde edilen model hücre hattı ile işlevsel protein çalışmaları mümkün hale gelmiştir.