İmmunoglobulin G saflaştırılması için L-lizin baskılanmış seçici kriyojellerin hazırlanması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: SENEM ÇULHA
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): SERAP ŞENEL
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:IgG glikoproteini, bağışıklık sistemi zayıf olan hastalarda enfeksiyon önleyici olarak ve pediatrik HIV, kronik lenfositik lösemi gibi birçok hastalık için ise tedavi amacı ile kullanılmaktadır. Tedavide genellikle uzun zaman dilimlerinde yüksek doz gereksiniminden ötürü, IgG izolasyon veya saflaştırılması önem kazanır. Bu amaçla kullanılan afinite temelli (Protein A kromatografisi, boya afinite kromatografisi, tiyofilik afinite kromatografisi vb.) ve afinite bazlı olmayan (iyon değişim kromatografisi, boyutça ayırma kromatografisi vb.) yöntemler mevcuttur. Afinite temelli ayırma teknikleri arasında ''Moleküler Baskılama'' tekniği önemli bir seçenektir. Adsorpsiyon için seçilen matrisin seçiciliği arttırılmış olur. Matrisin kriyojel formunda sentezi ise makrogözenekler, kısa difüzyon yolu, alçak basınç düşmesi gibi birçok avantaj sağlar. Bu çalışmada, L-Lizin ve N-Metakriloil-L-aspartik asit sırası ile kalıp molekül ve fonksiyonel monomer olarak seçilerek, epitop baskılama tekniği ile L-Lizin baskılanmış poli(HEMA-MAAsp) kriyojelleri sentezlenip, FTIR, SEM, BET, şişme ve sıkma testleri ile karakterize edilmiştir. Baskılanmış ve baskılanmamış kriyojeller için spesifik yüzey alanları sırası ile 34.2 m2/g ve 21.3 m2/g' dır. Adsorpsiyon-desorpsiyon işlemi sürekli sistemde incelenerek, adsorpsiyon kapasitesine etki eden faktörler optimize edilmiştir. 25°C'de, pH:7.0, 0.5 mL/dak akış hızı ve 1.0 mg/mL'lik IgG başlangıç derişimi ve 2 saat etkileşim süresi için saptanan adsorpsiyon kapasitesi 55.1 mg/g'dır. Plazma ile yapılan çalışmalar sonunda 1/20 seyreltilmiş plazmadan % 90.4 IgG uzaklaştırılmıştır. 0.5 M NaCl ile saptanan desorpsiyon oranları % 90'ın üstündedir. Kriyojelin adsorpsiyon kapasitesinde önemli bir değişme olmaksızın on kez tekrar döngüde kullanılabileceği saptanmıştır. Adsorpsiyon izotermi Langmuir modeline, adsorpsiyon kinetiği ise yalancı-ikinci dereceden modele uymaktadır. Sentezlenen, baskılanmış kriyojellerin IgG'ye; albumine göre 1.79 kat, hemoglobine göre ise 1.45 kat daha seçici olduğu saptanmıştır. Ayrıca adsorpsiyona ait ?Hº, ?Sº, ?Gº gibi termodinamik parametreler hesaplanmıştır.