T-2 toksininin kan-testis bariyeri üzerine etkisinin SerW3 hücre hattında araştırılması
Tezin Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2015
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: ELİF KARACAOĞLU
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): GÜLDENİZ SELMANOĞLU
Özet:Temel besin kaynağı olarak tüketilen tahıllarda çoğalan funguslar tarafından üretilen mikotoksinler insan sağlığını tehdit etmektedirler. Fusarium türü funguslar tarafından tahıl ve tahıl ürünlerinde oluşan bir mikotoksin olan T-2 toksini de insan sağlığı için potansiyel tehlike oluşturmaktadır. T-2 toksininin erkek üreme sistemini olumsuz etkilediği ve sperm sayısında azalmaya neden olduğu bilinmekle birlikte toksisite mekanizması bilinmemektedir. Bu çalışmada testiste sperm hücrelerinin gelişimi sırasında germ hücrelerine mekanik olarak destek sağlayan, aynı zamanda kan-testis bariyerinin oluşmasında önemli işlevlere sahip Sertoli hücrelerinde T-2 toksininin potansiyel etkilerinin araştırılması hedeflenmiştir. Bu tez çalışması kapsamında, sıçan Sertoli hücre hattı olan SerW3 hücreleri 12, 120 ve 1200 ng/ml dozlarında T-2 toksini ile 24 ve 48 saat boyunca inkübe edilmiştir. İnkübasyon süresi sonrasında, SerW3 hücreleri hücre canlılığı testi (MTT), laktat dehidrogenaz (LDH) sitotoksisite testi ve tripan mavisi hücre canlılığı testi ile sitotoksisite açısından değerlendirilmiştir. Sitotoksisite testlerinin yanı sıra, SerW3 hücrelerinde Sertoli hücre bariyerinde yer alan proteinlerden okludin, ZO-1, N-kaderin ve β-katenin proteinleri hücresel lokalizasyonlarının belirlenmesi amacıyla immünfloresan olarak boyanmış, okludin ve N-kaderin proteinlerinin ifadesinde meydana gelebilecek değişiklikler Western blotlama yöntemi ile gösterilmiştir. Ayrıca Sertoli hücre bariyerinin bütünlüğünün toksin maruziyeti sonrasında değerlendirilmesi için transepiteliyal elektrisel direnç (TEER) ölçümü yapılmıştır. Sitotoksisite testlerinden MTT, LDH ve tripan mavisi sonuçlarına göre, T-2 toksini doz ve inkübasyon süresine bağlı olarak SerW3 hücrelerinde sitotoksisite artışına neden olmuştur. 120 ve 1200 ng/ml dozlarında hücreler LDH ve tripan mavisi testine daha çok hassasiyet göstermişlerdir. İmmünfloresan boyama sonuçları T-2 toksininin artan doz ve inkübasyon süresine bağlı olarak okludin, ZO-1, N-kaderin ve β-katenin ifadelerinde azalmaya neden olduğunu göstermiştir. Ayrıca toksin ile inkübasyon sonucunda N-kaderinin SerW3 hücrelerinde sitoplazmada konumlandığı gösterilmiştir. Western blotlama sonuçları, okludin ve N-kaderin protein ifadelerinde doza ve inkübasyon süresine bağlı olarak azalma olduğunu göstermiştir. Aynı zamanda, toksin uygulanan gruplarda TEER değerlerinde meydana gelen azalma immünfloresan boyama ve Western blotlamadan elde edilen sonuçları desteklemektedir. Bu sonuçlar, T-2 toksininin SerW3 hücrelerinde yüksek dozlarda sitotoksisiteye neden olduğunu, ayrıca Sertoli hücreleri arasında bulunan hücreler arası bağlantı proteinlerinin ifadelerinde değişikliklere neden olarak kan-testis bariyeri geçirgenliğinin olumsuz olarak etkilediğini göstermiştir.