İnsan serum bütirilkolinesterazının karaciğer HepG2 hücrelerinde lipid metabolizması ile etkileşiminin incelenmesi

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Biyokimya A.B.D., Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2015

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: MÜSLÜM GÖK

Danışman: Ebru Bodur

Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu

Özet:

Gök, M. İnsan serum bütirilkolinesterazının karaciğer HepG2 hücrelerinde lipid metabolizması ile etkileşiminin incelenmesi. Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Yüksek Lisans Tezi, Ankara, 2015. Karaciğerde sentezlenen bütirilkolinesteraz (BChE), çoğunlukla ksenobiyotiklerin detoksifikasyonu ile ilişkilendirilir. Daha önce sedanter erkek öğrenciler ile yaptığımız çalışmada, egzersiz ve/veya konjuge linoleik asit (CLA) uygulaması ile BChE ve serbest yağ asit (FFA) seviyelerinin değiştiğini gösterdik. Bu çalışmada linoleik asit (LA) ve α-linolenik asit (ALA)'i HepG2 hücrelerine uygulayarak, bu lipidlerin BChE ekspresyonuna etkilerini gözlemleyip lipid metabolizmasıyla BChE'nin ilişkisini inceledik. Deney grubumuz, BChE ekspresyonunu ve LA ile ALA uygulamalarının hücre döngüsündeki etkilerini incelediğimiz normal HepG2 hücrelerinden oluşmaktadır. HepG2 hücreleri Reverse transkriptaz PCR (RT-PCR) analizinde herhangi bir BChE ekspresyonu göstermedi. Bu yüzden doğal tip insan BChE plazmidi çoğaltılıp HepG2 hücrelerine transfeksiyonu yapıldı. Akım sitometrisi ile analiz edilen BChE transfeksiyonu yapılmamış HepG2 hücrelerinde LA ve ALA'nın yüksek konsantrasyonda (sırasıyla 500 μM ve 50 μM) uygulaması HepG2 hücreleri üzerinde toksik etki gösterdi. ALA'ya göre daha toksik etki gösteren LA, HepG2 hücrelerinin tutunmasını engelledi. WST-1 yöntemi ile LA için IC50 değeri 149.3 μM olarak bulundu ve çalışma için uygun ALA ve LA konsantrasyonları 5 μM olarak belirlendi. RT-PCR ve aktivite sonuçlarında gözlemlediğimiz üzere, BChE plazmidinin HepG2 hücrelerine transfeksiyonu BChE ifadesinde artışla sonuçlandı. BChE'nin HepG2 hücrelerine transfeksiyonu sonrası ALA'nın 5 μM uygulaması, hem transfeksiyon işlemi yapılan hem de transfeksiyon işlemi yapılmayan hücrelere göre BChE ifadesinde artışa neden oldu. Bu BChE ifadesindeki artış, LA uygulamasıyla gözlenen toksik etkiyi azalttı ve hücre sayısında artışa neden oldu ancak hayalet hücre görünümünü sürdürdü. Diğer yandan ALA uygulaması hem BChE plazmidi transfeksiyonu yapılan hem de herhangi bir transfeksiyon işlemi yapılmayan HepG2 hücrelerinde, BChE ifadesinde ve BChE aktivitesinde belirgin bir artışa neden oldu. Sonuçlarımız BChE ile lipid birikiminin ve hücre çoğalmasını arttığını gösterdi. Elde ettiğimiz bulgular BChE'nin lipid metabolizması ile ilişkili olduğunu göstermektedir. Anahtar kelimeler: Bütirilkolinesteraz, HepG2, Linoleik asit, α-Linolenik asit, ekspresyon analizleri.