Fibronektin saflaştırılması için kriyojel monolitik kolonların hazırlanması

---

Tezin Türü: Doktora

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji A.B.D., Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 2012

Tezin Dili: Türkçe

Öğrenci: IŞIK PERÇİN DEMİRÇELİK

Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): ADİL DENİZLİ

Özet:

Fibronektin, birçok hücrenin yüzeyinde ve plazma dahil hücrelerarası sıvılarda bulunan yüksek molekül ağırlıklı bir glikoproteindir. Fibronektin, embriyonik gelişim, yara iyileşmesi ve hemostaz gibi birçok önemli fizyolojik süreçte rol alır. Bu nedenle fibronektinin saflaştırılması hem tedavide kullanılması açısından hem de biyolojik açıdan önemlidir. Bu çalışmada fibronektinin afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılması amaçlanmıştır. Yeni nesil polimerik sistemlerden biri olan poli(hidroksietilmetakrilat) (PHEMA) kriyojel polimer destek olarak hazırlanmış ve ligand olarak fibronektine yüksek afinite gösteren jelatin seçilmiştir. PHEMA kriyojel şişme testleri, infrared spektroskopisi, taramalı elektron mikroskobu (SEM) ve yüzey alanı ölçümü ile karakterize edilmiştir. PHEMA kriyojelin kan uyuşabilirliği pıhtılaşma testleri ile araştırılmıştır. Jelatin immobilize PHEMA kriyojele fibronektin adsorbsiyonu sıcaklık, başlangıç fibronektin derişimi, ligand yükleme miktarı, iyonik şiddet, akış hızı ve zaman parametreleri açısından incelenmiştir. Elde edilen verilere adsorbsiyon modelleri ve kinetikleri uygulanmıştır. Jelatin immobilize PHEMA kriyojelin fibronektini ayırmadaki etkinliği albumin, lizozim ve IgG ile karşılaştırılarak FPLC sisteminde gösterilmiştir. Jelatin immobilize PHEMA kriyojel kullanılarak insan plazmasından %64 verimle fibronektin elde edilmiştir. Son olarak, desorbe fibronektindeki konformasyonel değişim florimetre ile araştırılmış, saflığı SDSPAGE ile kontrol edilmiştir.