Yüzey plazmon rezonans temelli immunoglobulin G sensörünün hazırlanması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Hacettepe Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji A.B.D., Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2010
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: GİZEM ERTÜRK
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): ADİL DENİZLİ
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Sunulan çalışmanın amacı, IgG tayini için Fab fragmanları baskılanmış yüzey plazmon rezonans temelli biyosensör hazırlanmasıdır. Bu amaçla, SPR biyosensör allil merkaptan ile modifiye edilmiş ve allil gruplarının yönlenmesi sağlanmıştır. İlk basamakta, N-metakroil-(L)-histidin metil ester (MAH) monomeri, metakriloil klorür ve L-histidin metil esterin reaksiyonu ile sentezlenmiştir. Daha sonra IgG moleküllerinin papain enzimi ile enzimatik hidrolizi sonucunda Fab fragmanları elde edilmiştir. Kalıp molekül olarak kullanılan Fab fragmanları ve MAH monomeri ile ön kompleks hazırlanmıştır. Fab fragmanları baskılanmış SPR çipleri, farklı oranlarda EGDMA, HEMA, AIBN ve MAH-Fab kompleksi varlığında hazırlanmıştır. Ayrıca kontrol deneyi için kalıp molekül olan Fab fragmanları kullanılmadan aynı şekilde baskılanmamış SPR çipi de hazırlanmıştır. Hazırlanan SPR sensörler, atomik kuvvet mikroskobu (AFM), elipsometre, FTIR ve temas açısı ölçümleriyle karakterize edilmiştir. Kalınlık ölçümleri ve AFM görüntüleri, Fab fragmanlarının çip yüzeyine hemen hemen tek tabakalı olarak baskılandığını göstermektedir. Desorpsiyon çalışmaları, kesikli sistemde 1 M NaCl (20 mM, pH:7.0 fosfat tamponu) kullanılmasıyla gerçekleştirilmiştir. Baskılanmış ve baskılanmamış sensörlerin Fab ve IgG tayin duyarlılığı, Fab ve IgG çözeltileri (pH: 7.0 fosfat tamponunda) ve seyreltilmiş plazma örnekleri ile araştırılmıştır. Baskılanmış sensörler, baskılanmamışlara göre Fab ve IgG'ye daha fazla duyarlılık göstermişlerdir. Farklı derişimlerdeki Fab ve IgG çözeltileri adsorpsiyon kinetiklerinin belirlenmesinde kullanılmıştır. Langmuir adsorpsiyon modeli, bu afinite sistemi için en uygun model olarak bulunmuştur ve sonuçlar baskılanmış SPR sensör yüzeyindeki IgG bağlanma bölgelerinin homojen dağılımlı ve tek tabakalı olduğunu göstermiştir. Fab baskılanmış sensörlerin seçiciliğini göstermek için Fab, IgG, sığır serum albümini (BSA) ve Fc fragmanlarının yarışmacı adsorpsiyonu araştırılmıştır. Sonuçlar, baskılanmış sensörün Fab ve IgG için yüksek seçiciliğe ve duyarlılığa sahip olduğunu göstermektedir.