Fare Metastaz Modelinde Luciferaz Ekspresyonu Gösteren LLC-1 Akciğer Kanseri Hücrelerinin Mikrometastazlarının Tespiti: qPCR ve Biyolüminesans Görüntülemenin Karşılaştırılması

Creative Commons License

OZTÜRK S. C.

Türk Doğa ve Fen Dergisi, cilt.15, sa.2, ss.33-38, 2026 (TRDizin)

Özet

Bu çalışma, luciferaz eksprese eden Lewis Akciğer Karsinomu hücreleri (LLC1-Luc2) kullanılarak oluşturulmuş bir fare akciğer kanseri modelinde mikrometastazların tespitini araştırmaktadır. Çalışmada biyolüminesans görüntüleme ile erkeklere özgü cinsiyet belirleyici bölge Y genini hedefleyen kantitatif PCR yöntemleri karşılaştırılmıştır. LLC1-Luc2 hücreleri, eşgenik metastaz modeli oluşturmak amacıyla dişi C57BL/6 farelerine intravenöz olarak enjekte edilmiştir. Metastatik ilerleme, 1., 7., 14., 21. ve 28. günlerde kaydedilen luciferaz sinyalleri ile dört hafta boyunca akciğer ve karaciğerlerde biyolüminesans görüntüleme kullanılarak takip edilmiştir. Aynı zamanda, erkek kökenli LLC1-Luc2 hücreleri ile dişi konaklar arasındaki cinsiyet uyumsuzluğundan yararlanılarak erkeklere özgü cinsiyet belirleyici bölge Y geninin amplifikasyonu yoluyla kantitatif PCR ile metastatik hücre sayıları belirlenmiştir. Hücre sayıları ile kantitatif PCR döngü eşik değerleri arasındaki korelasyonu göstermek amacıyla bir standart eğri oluşturulmuş ve böylece metastatik yükün hassas tahmini sağlanmıştır. Sonuçlar, biyolüminesans görüntülemenin derin dokulardaki metastatik odakları etkili biçimde görselleştirdiğini, ancak kantitatif PCR’ın özellikle erken evrelerde veya düşük hücre sayısına sahip lezyonlarda mikrometastazların tespitinde üstün duyarlılık sağladığını göstermiştir. Biyolüminesans görüntüleme ile cinsiyet belirleyici bölge Y genine dayalı kantitatif PCR’ın entegrasyonu, metastazın nitel ve nicel değerlendirilmesi için sağlam bir çerçeve sunmakta ve antimetastatik tedavilerin preklinik değerlendirilmesi için değerli bilgiler sağlamaktadır.
This study investigates the detection of micrometastases in a mouse model of lung cancer using luciferase-expressing Lewis Lung Carcinoma cells (LLC1-Luc2), comparing bioluminescence imaging and quantitative PCR targeting the sex determining region Y gene. LLC1-Luc2 cells were intravenously injected into female C57BL/6 mice to establish a syngeneic metastasis model. Metastatic progression in lungs and liver was monitored over four weeks using bioluminescence imaging, with luciferase signals recorded on days 1, 7, 14, 21, and 28. Concurrently, quantitative PCR was employed to quantify metastatic cell numbers by amplifying the male-specific sex determining region Y gene, leveraging the sex mismatch between male-derived LLC1-Luc2 cells and female hosts. A standard curve was generated to correlate quantitative PCR cycle threshold values with cell numbers, enabling precise estimation of metastatic burden. Results demonstrated that BLI effectively visualized metastatic foci in deep tissues, while quantitative PCR provided superior sensitivity for detecting micrometastases, particularly at early stages or in low-cell-number lesions. The integration of bioluminescence imaging and sex determining region Y gene quantitative PCR offers a robust framework for both qualitative and quantitative assessment of metastasis, providing valuable insights for preclinical evaluation of anti-metastatic therapies