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Parasite (Paris, France), vol.33, pp.18, 2026 (SCI-Expanded, Scopus)
This article provides a comprehensive guide for the processing and mounting of phlebotomine sand fly specimens, which is crucial for species identification and pathogen detection and isolation. It discusses a range of techniques suitable for both field and laboratory settings. The guide includes detailed instructions on sand fly collection, handling, covering, and euthanasia (recommending dry freezing or CO2 over chemicals) as well as conservation strategies, such as cold storage and preservation in ethanol. The quality of preparation of certain anatomical structures (genital organs, head and wings) is essential for their proper microscopic observation and is described in this work. The article also presents detailed sample processing, including the clearing process with agents such as potassium hydroxide then Marc-André solution. The mounting process compares different media, emphasizing their optical properties and preservation potential. Hoyer fluid (also known as chloral gum) is recommended for quick observation, particularly for spermathecae, due to its clarity, although it is not suitable for long-term storage. Other media discussed include polyvinyl alcohol, Euparal® (for limited water tolerance), and Canada balsam (a hydrocarbon-soluble medium), with the latter two offering long-term preservation capabilities. Innovative molecular biology approaches such as DNA sequencing and MALDI-ToF, which require particular attention to sample processing, are also addressed. Furthermore, short video clips illustrating various mounting techniques as well as translations in many different languages are provided, allowing the guideline to reach the diverse needs and expectations of the global scientific community. Title: Traitement et montage des phlébotomes : un guide consensuel. Abstract: Cet article propose un guide complet pour le traitement et le montage des phlébotomes, étapes cruciales pour l’identification des espèces et la détection ou l’isolement des pathogènes. Il aborde diverses techniques adaptées au terrain comme au laboratoire. Le guide comprend des instructions détaillées sur la collecte, la manipulation, la protection et l’euthanasie des phlébotomes (avec recommandation de la congélation à sec ou du CO2 plutôt que de l’usage de produits chimiques), ainsi que sur les stratégies de conservation telles que la réfrigération et la conservation dans l’éthanol. La préparation des structures anatomiques spécifiques (organes génitaux, tête et ailes) pour l’observation microscopique est privilégiée dans la description des techniques de dissection. Le document présente également le traitement détaillé des échantillons, notamment la clarification à l’aide de solutions telles que la potasse puis le liquide de Marc-André. Le processus de montage compare différents milieux, en soulignant leurs propriétés optiques et leur potentiel de conservation. Le liquide de Hoyer (également appelé gomme au chloral) est recommandé pour l’observation rapide, en particulier pour les spermathèques, en raison de sa limpidité, bien qu’il ne convienne pas à la conservation à long terme. D’autres milieux de culture sont abordés, notamment l’alcool polyvinylique, l’Euparal® (pour une tolérance limitée à l’eau) et le baume du Canada (un milieu soluble dans les hydrocarbures), ces deux derniers permettant une conservation à long terme. Les approches innovantes de biologie moléculaire, telles que le séquençage de l’ADN et la spectrométrie de masse MALDI-ToF, qui exigent une attention particulière lors du traitement des échantillons, sont également présentées. De plus, de courtes vidéos illustrant diverses techniques de montage et des traductions en de nombreuses langues sont disponibles, permettant ainsi de répondre aux besoins et attentes variés de la communauté scientifique internationale.